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制备生物素结合蛋白柱是该方案的关键步骤之一，需要选择合适的载体材料和生物素结合蛋白。目标蛋白的表达和标记需要充分考虑目标蛋白的特性和实验需求。样品处理、柱层析、洗脱和收集等步骤都需要严格控制条件，以保证纯化效果和蛋白质的活性。